血清脂蛋白電泳原理和操作方法

血清脂蛋白，當(dāng)前在臨床應(yīng)用方面，它的作用還是比較大的，所以對(duì)于很多的患者，就想全面了解一下血清脂蛋白電泳原理和操作方法，為了你能盡快的了解，下面內(nèi)容就做了詳細(xì)的介紹，你可以充分的了解一下，相信會(huì)對(duì)自己以后有幫助.

原理

脂蛋白是在堿性pH條件下，以瓊脂糖凝膠或醋酸纖維條帶作為載體，從陽(yáng)性方向來(lái)進(jìn)行分離的。形成的蛋白區(qū)帶可以用脂肪染料如蘇丹黑或者油紅染色，它們只用于脂蛋白染色。在瓊脂中可能會(huì)有附加的聚陰離子和二價(jià)陽(yáng)離子沉淀。脂蛋白沉淀帶用光密度計(jì)可立即定量分析。脂蛋白區(qū)帶也可以被切開(kāi)后重新溶解，對(duì)各區(qū)帶進(jìn)行膽固醇濃度的直接酶法檢測(cè)。另外，有報(bào)道在用薄層瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分離后，可直接檢測(cè)各脂蛋白組分中的膽固醇含量的方法。

操作方法

(1)將緩沖液加入電泳槽內(nèi)，調(diào)節(jié)兩側(cè)槽內(nèi)的緩沖液，使其處于同一平面。

(2)醋酸纖維素薄膜的準(zhǔn)備：取醋酸纖維素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(負(fù)極側(cè))1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線，做點(diǎn)樣標(biāo)記。編號(hào)，并標(biāo)明正、負(fù)極后，將薄膜置于巴比妥-巴比妥鈉緩沖液中浸泡，待充分浸透后(一般為20min)取出，夾于潔凈濾紙中間吸去多余的緩沖液。

(3)將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼于電泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取無(wú)溶血血清3～5μl于橫線處沿橫線加樣，樣品應(yīng)與薄膜的邊緣保持一定的距離，以免電泳圖譜中的蛋白區(qū)帶變形，待血清滲入薄膜后，反轉(zhuǎn)薄膜，使光面朝上，平直地貼于電泳槽支架上，用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩沖液連通，稍待片刻。

(4)接通電源，注意醋酸纖維素薄膜上的正、負(fù)極，切勿接錯(cuò)。電壓90～150V，電流0.4～0.6mA/cm(不同的電泳儀所需電壓，電流可能不同，應(yīng)靈活掌握)，夏季通電45min，冬季通電時(shí)間稍長(zhǎng)，約為60min，電泳區(qū)帶展開(kāi)約25～35mm即可。

(5)染色：通電完畢，取下薄膜直接浸于麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中，染色5～10min(以白蛋白區(qū)帶染透為止)，然后在漂洗液中漂去剩余染料，直至背景無(wú)色為止。

(6)定量：

①比色法：將漂洗的薄膜吸干，剪下各染色的蛋白區(qū)帶入相應(yīng)的試管中，在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml(計(jì)算時(shí)吸光度乘以2)，其余各管加3ml，振搖數(shù)次，置37℃水箱20min使其色澤浸出。氨基黑10B染色用分光光度計(jì)在620nm處讀取各管吸光度，然后計(jì)算出各管的含量(同時(shí)做空白管對(duì)照)。

麗春紅S染色時(shí)浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉，加入量同上法。10min后，白蛋白管內(nèi)加400ml/L醋酸0.6ml(計(jì)算吸光度時(shí)乘以2)，其余各管加0.3ml，以中和部分氫氧化鈉，使色澤加深，必要時(shí)離心，取上清液用分光光度計(jì)在520nm處讀取各管的吸光度(同時(shí)作空白對(duì)照)，然后計(jì)算各自的含量。

②光密度計(jì)掃描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液(為防止透明液被稀釋影響透明結(jié)果)，將薄膜浸入透明液中2～3min，然后取出，以滾動(dòng)的方式平貼于潔凈無(wú)劃痕的載物玻璃片上(切勿產(chǎn)生氣泡)，將此玻片豎立片刻，除去多余透明液后，置于恒溫90～100℃的烘箱內(nèi)，烘烤10～15min，取出冷卻至室溫，用此法透明的各蛋白區(qū)帶鮮明，薄膜平整，可供直接掃描和永久保存(用氫萘或液體石蠟透明，應(yīng)將漂洗過(guò)的薄膜烘干后進(jìn)行透明，此法透明的薄膜不能存久，且易發(fā)生皺折)。②掃描定量：將已透明的薄膜放入全自動(dòng)光密度計(jì)或其他光密度計(jì)暗箱內(nèi)，進(jìn)行掃描分析。

血清脂蛋白電泳原理和操作方法，本篇的內(nèi)容就為很多的患者，做了詳細(xì)的介紹，所以要想全面的了解，可以通過(guò)以上的介紹，具體的了解一下它的原理，以及操作的方法，相信通過(guò)了解，就能具體對(duì)原理和操作方法有一個(gè)充分的認(rèn)識(shí)。